Клетка культураларынын булганышы оңой эле клетка маданият лабораторияларында эң кеңири таралган көйгөй болуп калышы мүмкүн, кээде өтө оор кесепеттерге алып келет.Клетка маданиятын булгоочу заттарды эки категорияга бөлүүгө болот, химиялык булгоочу заттар, мисалы, орто, сыворотка жана суу кирлери, эндотоксиндер, пластификаторлор жана жуугучтар жана бактериялар, көктөр, ачыткылар, вирустар, микоплазмалар инфекциясы аркылуу өтүүчү биологиялык булгоочу заттар.Башка клетка линиялары менен булганган.Булганууну толугу менен жок кылуу мүмкүн болбосо да, анын булагын кылдат түшүнүү жана жакшы асептикалык ыкмаларды сактоо менен анын жыштыгын жана оордугун азайтууга болот.
1.Бул бөлүмдө биологиялык булгануунун негизги түрлөрү көрсөтүлгөн:
Бактериялык булгануу
Көктүн жана вирустун булганышы
Микоплазманын булганышы
Ачыткы менен булгануу
1.1 Бактериялык булгануу
Бактериялар – бир клеткалуу микроорганизмдердин чоң тобу.Алар, адатта, диаметри бир нече микрон жана чөйрөлөрдөн таякчаларга жана спиральдарга чейин ар кандай формада болушу мүмкүн.Алардын бардык жерде болушу, өлчөмү жана тез өсүү темпи менен бактериялар ачыткылар жана көктөр менен бирге клетка маданиятында эң кеңири таралган биологиялык булгоочу заттар болуп саналат.
1.1.1 Бактериялык контаминацияны аныктоо
Бактериялык контаминация инфекция жуккандан кийин бир нече күндүн ичинде маданиятты визуалдык текшерүү менен оңой аныкталат;
Инфекцияланган маданияттар, адатта, булуттуу (б.а., булуттуу), кээде бетинде жука пленка менен көрүнөт.
Маданият чөйрөсүнүн рН кескин төмөндөшү да көп кездешет.
Төмөн кубаттуу микроскоптун астында бактериялар клеткалардын ортосунда кыймылдап турган кичинекей гранулдар болуп көрүнөт, ал эми жогорку кубаттуу микроскоптун астында байкоо айрым бактериялардын формаларын чече алат.
1.2 Көктүн жана вирустун булганышы
1.2.1 Көктүн булганышы
Калыптар — гифа деп аталган көп клеткалуу жипчелер түрүндө өскөн грибок падышачылыгынын эукариоттук микроорганизмдери.Бул көп клеткалуу жипчелердин туташтыруучу тармактары колониялар же мицелия деп аталган генетикалык жактан окшош ядролорду камтыйт.
Ачыткылардын булганышы сыяктуу, культуранын рН булгануунун баштапкы фазасында туруктуу бойдон калат жана андан кийин культура катуу инфекцияга чалдыгып, булуттуу болуп калганда тез өсөт.Микроскоптун астында мицелий көбүнчө жип сымал, кээде споралардын жыш топтомдору түрүндө болот.Көптөгөн көктүн споралары өтө катаал жана ыңгайсыз чөйрөдө алардын уктап жаткан фазасында жашай алышат жана туура өсүү шарттары кездешкенде гана активдешет.
1.2.2 Вирустун булгануусу
Вирустар микроскопиялык жугуштуу агенттер болуп саналат, алар көбөйүү үчүн кабыл алуучу клетканын аппаратын ээлейт.Алардын өтө кичинекей өлчөмү аларды культурада аныктоону жана клетка культурасынын лабораторияларында колдонулган реагенттерден чыгарууну кыйындатат.Көпчүлүк вирустар өз ээлерине өтө катуу талаптарды койгондуктан, алар адатта хосттон башка түрлөрдүн клетка маданиятына терс таасирин тийгизбейт.
Бирок, вирус жуккан клетка культураларын колдонуу лаборатория кызматкерлеринин ден соолугуна олуттуу коркунуч келтириши мүмкүн, айрыкча лабораторияда адамдын же примат клеткалары өстүрүлсө.
Клетка культураларында вирустук инфекцияны электрондук микроскопия, антителолордун жыйындысы менен иммуноскопиялоо, ELISA же тиешелүү вирустук праймерлер менен ПТР аркылуу аныктоого болот.
1.3 Микоплазма менен булгануу
Микоплазмалар – клетка дубалдары жок жөнөкөй бактериялар жана алар өзүн өзү көбөйтүүчү эң кичинекей организмдер деп эсептелет.Өтө кичинекей өлчөмүнөн улам (көбүнчө 1 микрондон аз) микоплазманы аныктоо кыйын, алар өтө жогорку тыгыздыкка жетип, клетка культураларынын начарлашына алып келет;Ага чейин, адатта, инфекциянын ачык белгиси жок.
1.3.1 Микоплазманын булганышын аныктоо
Кээ бир жай өсүүчү микоплазмалар культураларда клетканын өлүмүнө алып келбестен сакталып калышы мүмкүн, бирок алар маданияттардагы кабыл алуучу клеткалардын жүрүм-турумун жана метаболизмин өзгөртөт.
Өнөкөт микоплазма инфекциясы суспензия культурасында клетканын пролиферациясынын төмөндөшү, каныккан тыгыздыктын азайышы жана агглютинация менен мүнөздөлүшү мүмкүн.
Бирок, микоплазманын булганышын аныктоонун бирден-бир ишенимдүү жолу - флуоресценттик боёо (мисалы, Hoechst 33258), ELISA, ПТР, иммуноскопия, авторрадиография же микробдук тестирлөө аркылуу культураны үзгүлтүксүз текшерүү.
1.4 Ачыткы менен булгануу
Ачыткылар – бир клеткалуу эукариоттор грибок падышачылыгынын, өлчөмү бир нече микрондон (көбүнчө) 40 микронго чейин (сейрек).
1.4.1 Ачыткылардын булганышын аныктоо
Бактериялык булгануудай эле, ачыткы менен булганган маданияттар булганып калышы мүмкүн, айрыкча булгануу өнүккөн стадияда болсо.Ачыткы менен булганган маданияттардын рНы булгануу күчөгөнгө чейин өтө аз өзгөрөт, бул этапта рН адатта жогорулайт.Микроскоптун астында ачыткы жеке жумуртка сымал же тоголок бөлүкчөлөр болуп көрүнөт жана майда бөлүкчөлөрдү жаратышы мүмкүн.
2. Кросс инфекция
Микробдук булгануу сыяктуу кеңири жайылбаса да, HeLa жана башка тез өсүүчү клетка линиялары менен көптөгөн клетка линияларынын кеңири кайчылаш булганышы олуттуу кесепеттерге алып келген так аныкталган көйгөй болуп саналат.Клетка линияларын кадыр-барктуу клетка банктарынан алыңыз, клетка линияларынын өзгөчөлүктөрүн дайыма текшериңиз жана жакшы асептикалык ыкмаларды колдонуңуз.Бул практикалар кайчылаш булгануудан качууга жардам берет.ДНК манжа изин изилдөө, кариотиптөө жана изотиптөө сиздин клетка маданиятыңызда кайчылаш булгануу бар же жок экенин ырастай алат.
Микробдук булгануу сыяктуу кеңири жайылбаса да, HeLa жана башка тез өсүүчү клетка линиялары менен көптөгөн клетка линияларынын кеңири кайчылаш булганышы олуттуу кесепеттерге алып келген так аныкталган көйгөй болуп саналат.Клетка линияларын кадыр-барктуу клетка банктарынан алыңыз, клетка линияларынын өзгөчөлүктөрүн дайыма текшериңиз жана жакшы асептикалык ыкмаларды колдонуңуз.Бул практикалар кайчылаш булгануудан качууга жардам берет.ДНК манжа изин изилдөө, кариотиптөө жана изотиптөө сиздин клетка маданиятыңызда кайчылаш булгануу бар же жок экенин ырастай алат.
Посттун убактысы: 01-февраль 2023-ж