Клетка маданиятынын негизги артыкчылыктарынын бири клетканын көбөйүшүнүн физикалык химиясын (б.а. температура, рН, осмотикалык басым, O2 жана CO2 чыңалуусу) жана физиологиялык чөйрөнү (б.а. гормон жана азык концентрациясын) башкаруу жөндөмдүүлүгү.Температурадан тышкары, маданият чөйрөсү өсүү чөйрөсү тарабынан көзөмөлдөнөт.
Маданияттын физиологиялык чөйрөсү анын физикалык жана химиялык чөйрөсүндөй ачык болбосо да, сыворотканын компоненттерин жакшыраак түшүнүү, көбөйүү үчүн зарыл болгон өсүү факторлорун аныктоо жана маданияттагы клеткалардын микрочөйрөсүн жакшыраак түшүнүү.(Б.а. клетка-клетканын өз ара аракеттенүүсү, газдын диффузиясы, матрица менен өз ара аракеттенүүсү) азыр кээ бир клетка линияларын сывороткасыз чөйрөдө өстүрүүгө мүмкүндүк берет.
1.Culture чөйрө клетканын өсүшүнө таасир этет
Клетка маданиятынын шарттары ар бир клетканын түрү үчүн ар кандай экенин эске алыңыз.
Белгилүү бир клетка түрү үчүн талап кылынган маданият шарттарынан четтөөнүн кесепеттери анормалдуу фенотиптердин экспрессиясынан баштап клетка маданиятынын толук бузулушуна чейин болот.Андыктан, сизди кызыктырган клетка линиясы менен таанышып чыгууну жана экспериментиңизде колдонгон ар бир продукт үчүн берилген көрсөтмөлөрдү так аткарууну сунуштайбыз.
2.Клеткаларыңыз үчүн оптималдаштырылган клетка маданияты чөйрөсүн түзүү боюнча чаралар:
Маданият каражаты жана сыворотка (көбүрөөк маалымат алуу үчүн төмөндө караңыз)
рН жана CO2 деңгээли (көбүрөөк маалымат үчүн төмөндө караңыз)
Пластик өстүрүү (көбүрөөк маалымат алуу үчүн төмөндө караңыз)
Температура (көбүрөөк маалымат алуу үчүн төмөндө караңыз)
2.1 Маданий каражаттар жана сыворотка
Маданият чөйрөсү маданий чөйрөнүн эң маанилүү бөлүгү болуп саналат, анткени ал клетканын өсүшү үчүн керектүү азыктарды, өсүү факторлорун жана гормондорду камсыздайт, культуранын рН жана осмотикалык басымын жөнгө салат.
Клетка культурасынын алгачкы эксперименттери кыртыштын экстрактыларынан жана дене суюктуктарынан алынган табигый чөйрөнү колдонуу менен жүргүзүлсө да, стандартташтыруу, медиа сапаты жана суроо-талаптын көбөйүшү акыркы маалымат каражаттарынын өнүгүшүнө алып келди.ЖМКнын үч негизги түрү – базалдык медиа, кыскартылган сыворотка медиасы жана сывороткасыз медиа жана аларда сыворотка кошулуу үчүн ар кандай талаптар бар.
2.1.1 Негизги каражат
Gibco клетка маданият чөйрөсү
Көпчүлүк клетка линиялары аминокислоталарды, витаминдерди, органикалык эмес туздарды жана көмүртек булактарын (мисалы, глюкоза) камтыган негизги чөйрөдө жакшы өсөт, бирок бул негизги медиа түзүмдөрү сыворотка менен толукталышы керек.
2.1.2 Азайтылган сыворотка
Gibco Low Serum Medium менен бөтөлкө
Клетка маданиятынын эксперименттеринде сыворотканын терс таасирин азайтуунун дагы бир стратегиясы сыворотка кыскартылган медианы колдонуу болуп саналат.Кыскартылган сыворотка чөйрөсү азык заттарга жана жаныбарлардан алынган факторлорго бай негизги орто формула болуп саналат, ал талап кылынган сыворотканын көлөмүн азайтышы мүмкүн.
2.1.3 Сывороткасыз чөйрө
Gibco сывороткасы жок бөтөлкө
Сывороткасыз чөйрө (SFM) сывороткаларды тиешелүү тамактануу жана гормондук формалар менен алмаштыруу аркылуу жаныбарлардын сывороткасын колдонууну айланып өтөт.Көптөгөн баштапкы культураларда жана клетка линияларында сывороткасыз орто формулалар бар, анын ичинде кытай Hamster Ovary (CHO) рекомбинантты протеин өндүрүү линиясы, ар кандай гибридома клетка линиялары, курт-кумурскалар Sf9 жана Sf21 (Spodoptera frugiperda), ошондой эле вирус өндүрүү үчүн хост үчүн (мисалы, 293, VERO, MDCK, MDBK) ж.б. Сывороткасыз чөйрөнү колдонуунун негизги артыкчылыктарынын бири өсүү факторлорунун ылайыктуу комбинациясын тандоо аркылуу клетканын белгилүү бир түрлөрү үчүн чөйрөнү тандап алуу мүмкүнчүлүгү болуп саналат.Төмөнкү таблицада сывороткасыз медианын артыкчылыктары жана кемчиликтери келтирилген.
Артыкчылык
Ачык-айкындуулукту жогорулатуу
Көбүрөөк ырааттуу аткаруу
Тазалоону жеңилдетүү жана кайра иштетүү
Клетка функциясын так баалоо
эмгек ендурумдуулугун жогорулатуу
Физиологиялык реакцияларды жакшыраак башкаруу
Жакшыртылган клетка медиа аныктоо
Кемчилик
Клетка түрүнө атайын орто формулага талаптар
Жогорку реагенттин тазалыгы керек
Өсүштүн басаңдашы
2.2.1 рН деңгээли
Көпчүлүк кадимки сүт эмүүчүлөрдүн клетка линиялары рН 7,4 жакшы өсөт, жана ар кандай клетка линияларынын ортосундагы айырмачылыктар аз.Бирок, кээ бир трансформацияланган клетка линиялары бир аз кислоталуу чөйрөдө (рН 7.0 – 7.4) жакшыраак өсө тургандыгы көрсөтүлгөн, ал эми кээ бир кадимки фибробласт клетка линиялары бир аз щелочтуу чөйрөнү (рН 7.4 – 7.7) артык көрүшөт.Sf9 жана Sf21 сыяктуу курт-кумурскалардын клетка линиялары рН 6,2де эң жакшы өсөт.
2.2.2 CO2 деңгээли
Өсүүчү чөйрө маданияттын рН деңгээлин көзөмөлдөйт жана рНнын өзгөрүшүнө туруштук берүү үчүн маданияттагы клеткаларды буферлейт.Адатта, бул буферлөө органикалык (мисалы, HEPES) же CO2-бикарбонаттын негизиндеги буферлерди камтуу менен ишке ашат.чөйрөнүн рН эриген көмүр кычкыл газынын (СО2) жана бикарбонаттын (HCO3-) назик балансына көз каранды болгондуктан, атмосферадагы СО2 өзгөрүшү чөйрөнүн рН өзгөрөт.Ошондуктан, СО2-бикарбонаттын негизинде буфер менен буфердик чөйрөнү колдонууда, өзгөчө ачык маданий идиштерде клеткаларды өстүрүүдө же жогорку концентрацияда трансформацияланган клетка линияларын өстүрүүдө экзогендик СО2ди колдонуу зарыл.Көбүнчө изилдөөчүлөр абада 5-7% СО2 колдонушса да, клетка маданиятынын эксперименттери көбүнчө 4-10% CO2 колдонушат.Бирок, туура рН жана осмотикалык басымга жетүү үчүн ар бир чөйрө сунушталган CO2 чыңалуусу жана бикарбонаттын концентрациясы бар;көбүрөөк маалымат үчүн, сураныч, орто өндүрүүчүнүн нускамаларын карагыла.
2.3 Пластмассаларды өстүрүү
Клетка маданиятынын пластмассалары ар кандай формаларда, өлчөмдөрдө жана ар кандай клетка маданиятына ылайыктуу беттерде бар.Клетка маданиятын колдонуу үчүн туура пластмассаны тандоого жардам берүү үчүн төмөндөгү клетка маданиятынын пластикалык беттик жол көрсөткүчүн жана клетка маданиятынын контейнерин колдонуңуз.
Бардык Thermo Scientific Nunc клетка маданиятынын пластиктерин көрүү (жарнама шилтемеси)
2.4 Температура
Клеткаларды өстүрүү үчүн оптималдуу температура көбүнесе клеткалар бөлүнүп турган ээсинин дене температурасына жана азыраак даражада температуранын анатомиялык өзгөрүүлөрүнө (мисалы, теринин температурасы скелет булчуңдарынын температурасынан төмөн болушу мүмкүн) көз каранды. ).Клетка маданияты үчүн, ысып кетүү ысып кетүүдөн да олуттуу көйгөй болуп саналат.Ошондуктан, инкубатордогу температура адатта оптималдуу температурадан бир аз төмөн коюлат.
2.4.1 Ар кандай клетка линиялары үчүн оптималдуу температура
Адамдын жана сүт эмүүчүлөрдүн клетка линияларынын көбү оптималдуу өсүш үчүн 36°Cден 37°Cге чейин сакталат.
Оптималдуу өсүш үчүн курт-кумурскалардын клеткалары 27°С температурада өстүрүлөт;алар төмөнкү температурада жана 27°C жана 30°C ортосундагы температурада жай өсөт.30°Сден жогору курт-кумурскалардын клеткаларынын жашоо жөндөмдүүлүгү төмөндөйт, 27°Сге кайтып келсе дагы, клеткалар калыбына келбейт.
Канаттуулардын клетка линиялары максималдуу өсүш үчүн 38,5°C керек.Бул клеткалар 37°C температурада кармалса да, алар жайыраак өсөт.
Муздак кандуу жаныбарлардан (мисалы, жерде-сууда жашоочулар, муздак суудагы балыктар) алынган клетка линиялары 15°Сден 26°Сге чейинки температуранын кеңири диапазонуна чыдай алат.
Посттун убактысы: 01-февраль 2023-ж